Biopelícula en Staphylococcus aureus sensibles y resistentes a meticilina / Biofilm in methicillin sensitive and resistant Staphylococcus aureus

La formación de biopelícula es una estrategia de vida para la mayoría de las bacterias, ya que aumenta las posibilidades de transferencia de material genético y la resistencia a antibióticos, participa en la comunicación celular y ofrece protección en condiciones adversas y variables del medio ambiente; lo que contribuye a una colonización exitosa del hospedador. Esta investigación se propuso determinar la capacidad de producir biopelícula en aislamientos de S. aureus. Se estudiaron 30 aislados (13 sensibles y 17 resistentes a meticilina) mediante ensayo sobre microplacas de cultivos celulares. Todas las cepas mostraron patrones de adherencia; 24 (80%), 4 (13%) y 2 (7%) exhibieron grados de adherencia moderado, débil y fuerte, respectivamente. 77% de las cepas sensibles resultaron moderadamente productoras, 13% débiles y 7% fuertes productoras de biopelícula. Las cepas resistentes presentaron mayormente moderada producción (82%) y el 18% débil producción. No hubo asociación entre el grado de adherencia y la susceptibilidad a la meticilina. La alta tasa de producción de biopelícula en cepas clínicas de S. aureus, sensibles y resistentes a meticilina, sugiere el peligro potencial que representan dichas cepas dentro y fuera de ambientes hospitalarios, dada la importancia que juegan las biopelículas en el desarrollo de infecciones crónicas.

The formation of biofilm is a life strategy for most bacteria, since it increases the possibilities of transfer of genetic material and resistance to antibiotics, participates in cellular communication and offers protection in adverse and variable environmental conditions; what contribute to a successful colonization of the host. This research aimed to determine the capacity to produce biofilm in isolates of S. aureus. Thirty isolates (13 sensitive and 17 resistants to methicillin) were studied by assay on cell culture microplates. All strains showed adherence patterns; 24 (80%), 4 (13%) and 2 (7%) exhibited degrees of moderate, weak and strong adhesion, respectively. 77% of sensitive strains were moderately productive, 13% weak and 7% strong producers of biofilm. The resistant strains presented a moderate production (82%) and 18% a weak production. There was no association between the degree of adherence and the susceptibility to methicillin. The high rate of biofilm production in clinical strains of S. aureus, sensitive and resistant to methicillin, suggests the potential danger posed by such strains inside and outside hospital environments, given the importance that biofilms play in the development of chronic infections.

Genotipos de resistencia antimicrobiana y su expresión fenotípica en cepas de Staphylococcus aureus / Genotypes for antimicrobial resistance and their phenotypic expression in Staphylococcus aureus strains

Se determinó la resistencia antimicrobiana mediante métodos fenotípicos y genotípicos a 106 cepas de S. aureus aisladas de pacientes atendidos en el Centro de Referencia Bacteriológica del Servicio Autónomo Hospital Universitario de Maracaibo durante el primer trimestre del 2009. El cultivo, aislamiento e identificación se realizó siguiendo la metodología convencional. Fenotípicamente, 103 cepas (97,17%) resultaron resistentes a penicilina G; 54 (50,94%) a meticilina; 43,39% a eritromicina (46) y 34,91% (37) a gentamicina. Además, 13 (12,26%) se mostraron intermedias a eritromicina. Genotípicamente, 90 cepas (84,91%) portaban el gen blaZ mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR); 53 (50%) acarreaban el gen mecA; sólo 10 (9,43%) albergaban el gen aac(6’)/aph(2’’); el gen ermA se detectó en 41 aislados (38,68%) y msrA en 17 (16,04%). Los resultados discordantes fueron: (1) Una cepa mecA-negativa; pero resistente a meticilina, la cual resultó blaZ-positiva e hiperproductora de b-lactamasas; (2) Una cepa resistente a eritromicina y negativa para los genes ermA, B, C y msr y; (3) veintiséis cepas gentamicina-resistentes; pero negativas para aac(6’)/aph(2’’). Los fenotipos y genotipos de resistencia antimicrobiana están relacionados; sin embargo, existe una marcada variabilidad en los determinantes genéticos de la resistencia lo que repercute, indudablemente en su expresión fenotípica. Para oxacilina y en menor proporción para eritromicina, existe una buena concordancia entre los fenotipos y genotipos de resistencia encontrados; observándose la mayor discrepancia en los aminoglicósidos, y penicilina G.

Antimicrobial resistance was determined for 106 S. aureus strain isolates from patients treated in the Bacteriological Reference Center at the University Hospital Autonomous Service, Maracaibo, during the first trimester of 2009, using phenotypic and genotypic methods. Culture, isolation and identification were performed following conventional methodology. Phenotypically, 103 strains (97.17%) were resistant to penicillin G; 54 (50.94%) to methicillin; 43.39% to erythromycin (46) and 34.91% (37) to gentamicin. In addition, 13 (12.26%) were intermediate to erythromycin. Genotypically, 90 strains (84.91%) carried the blaZ gene through the polymerase chain reaction (PCR); 53 (50%) carried the mecA gene; only 10 (9.43%) harbored the gene aac(6’)/aph(2’’); the gene ermA was detected in 41 isolates (38.68%) and msrA in 17 (16.04%). The discordant results were: (1) A mecA-negative, but methicillin-resistant strain, which proved blaZ-positive and hyper-productive of b-lactamases; (2) An erythromycin-resistant strain, negative for ermA, B, C and msrA genes, and; (3)Twenty-six gentamicin-resistant strains, negative for aac(6’)/aph(2’’). The phenotypes and genotypes of antimicrobial resistance are related; however, there is a marked variability in the genetic determinants for resistance, which undoubtedly affects phenotypic expression. For oxacillin and, to a lesser degree erythromycin, there is a good match between the resistance phenotypes and genotypes found, noting the greatest discrepancy in the aminoglycosides and penicillin G.

Resistencia a vancomicina en cepas de enterococcus faecium aisladas en un hospital universitario / Vancomycin resistance in enterococcus faecium strains isolated at a university hospital

Las especies que conforman el género Enterococcus, son cocos Gram positivos, que usualmente habitan el tracto intestinal de humanos y animales, pero que también pueden ser aislados de fuentes ambientales. Son capaces de sobrevivir a un amplio rango de condiciones ambientales adversas de estrés, lo que les permite colonizar un amplio rango de nichos, incluidos los ambientes hospitalarios. La patogenicidad nosocomial de los enterococos ha emergido en los últimos años, así como su incrementada resistencia a los antibióticos glicopéptidos. El presente estudio intenta determinar la resistencia a vancomicina de cepas de Enterococcus faecium aisladas en un hospital universitario en el período enero-diciembre del año 2009, así como caracterizar el determinante genético responsable de la resistencia. Para ello se utilizaron los métodos para determinar susceptibilidad a glicopéptidos descritos por el CLSI, adicionalmente se determinó el elemento genético responsable de la resistencia mediante la reacción en cadena de la polimerasa. El 48,81% de las cepas de E. faecium estudiadas fueron resistentes a vancomicina y el PCR demostró la presencia del gen vanA que confiere altos niveles de resistencia a glicopéptidos. Debido al elevado número de aislados resistentes a vancomicina dentro de la institución se sospecha de la presencia de un brote nosocomial producido por este microorganismo; esta cepa epidémica poseedora del gen vanA posiblemente está dispersa en los diferentes servicios de la institución, por lo que se sugiere realizarestudios epidemiológicos para determinar el rol que este microorganismos juega en la producción de infecciones nosocomiales en la institución estudiada

Genus Enterococcus species are gram positive cocci, usually inhabitants of human and animal intestinal tracts, but can also be isolated from their environmental sources. They are able to survive a wide range of adverse environmental stress conditions, allowing them to colonize a wide range of niches, including hospital environments. Nosocomial pathogenicity of enterococci has emerged in recent years, as well as their increased resistance to glycopeptide antibiotics. This study attempts to determine the resistance to vancomycin of Enterococcus faecium strains isolated in a university hospital during the January-December period of 2009, as well as to characterize the genetic determinant responsible for its resistance. Methods to determine susceptibility to glycopeptides described by CLSI were used; additionally, the genetic elements responsible for resistance were identified using the polymerase chain reaction. Of the E. faecium strains studied, 48.81% were resistant to vancomycin, and PCR showed presence of the vanA gene that confers high levels of resistance to glycopeptides. Due to the large number of isolates resistant to vancomycin, the presence of a nosocomial outbreak produced by this microorganism was suspected; this epidemic strain possessing a vanA gene is possibly scattered in different services of the institution; therefore, epidemiological studies should be performed to determine the role this microorganism plays in the production of nosocomial infections in the institution under study

Indicadores entéricos en vegetales frescos que se comercializan en mercados populares de Maracaibo / Enteric indicators in fresh vegetables sold at popular food markets in Maracaibo

Se analizó la calidad microbiológica de 300 vegetales (100 lechugas, 100 cilantros y 100 perejiles) en dos mercados de la ciudad de Maracaibo. Se determinó coliformes totales (CT), coliformes fecales (CF) y Escherichia coli por la técnica del número más probable. Los CT oscilaron entre 10³-10(9) NMP/gr en más del 80% de las lechugas adquiridas en ambos mercados; mientras que los CF se ubicaron entre 10¹-10(7) NMP/gr en 90% de las muestras del mercado 2. Para 96% de los cilantros los CT estuvieron entre 10(4)-10(9) NMP/gr. Los CF se ubicaron entre 10(4)-10(9) NMP/gr en 88% y 84% de las muestras del mercado 1 y 2. Los CT oscilaron entre 10(4)-10(9) NMP/gr en 90% o más de los perejiles. Se obtuvieron valores de CF entre 10³-10(9) NMP/gr en 82% y 60% de los especímenes recolectados en el mercado 1 y 2, respectivamente. 52% de las muestras de perejil adquiridas en el mercado 1 presentaron recuentos elevados para E. coli (10(4)-10(7)NMP/gr). Según los criterios microbiológicos para E. coli, 84,7% de los vegetales fueron satisfactorios y 15,3% insatisfactorios. Debido a la variabilidad de los niveles de coliformes y E. coli en los vegetales frescos, es recomendable establecer normas locales para evaluar la calidad microbiológica de estos alimentos.

The microbiological status of 300 vegetables (100 lettuces, 100 corianders, and 100 parsley) from two food markets in Maracaibo city was analyzed. Total coliforms (TC), fecal coliforms (FC) and Escherichia coli were determined by the most probable number technique. TC oscillated between 10³-10(9) MPN/gr in over 80% of the lettuces bought at both markets, while FC oscillated between 10-10(7) MPN/gr in 90% of the samples from Market 2. In 96% of the corianders, TC varied between 10(4)-10(9) MPN/gr, and FC varied between 10(4)-10(9) in 86% and 84% of the samples from Markets 1 and 2 respectively. In parsley, TC oscillated between 10(4)-10(9) in 90% or more of the total samples, and FC varied between 10³-10(9) in 82% and 60% of the samples from Market 1 and 2 respectively. In 52% of the parsley samples obtained from Market 1 there were high E. coli counts (10(4)-10(7) MPN/gr). According to the microbiological criteria for E. coli, 84.7% of the vegetables were satisfactory and 15.3% non satisfactory. Due to the variability of the coliform levels in fresh vegetables, it is advisable to establish local norms to evaluate the microbiological quality of this food.

Tipificación molecular y fenotípica de Staphylococcus aureus resistentes a meticilina (SAMR) en un hospital universitario / Molecular and phenotypical typification of methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) strains in a university hospital

Objective: To typify by molecular and phenotypical methods, MRSA strains, isolated from patients and nurses to establish their possible clonal origin. Materials and Methods: 50 MRSA strains isolated in a teaching hospital in Maracaibo (Venezuela) were analyzed. The typification of MRSA strains was performed by means of pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and antibiotyping. Results: In patients, 12 clusters (I-XII) and 19 antibiotypes were found; whereas in the health-care personnel, 6 clusters (I-VI) and two antbiotypes were detected. There was no statistically significative association between antibiotypes and band patterns obtained by PFGE (p>0.05). Conclusions: By means of detection of resistance markers and PFGE, it is feasible to discrimínate the nature of the clinical strains of MRSA. The obtained results show the possible nosocomial transmission of MRSA strains and their clonal spread in hospital departments, particularly at the ICU.

Objetivo: Tipificar por métodos moleculares y fenotípicos, las cepas SAMR aisladas de pacientes y personal de enfermería para establecer su posible origen clonal. Materiales y Métodos: Se analizaron 50 cepas SAMR aisladas en un Hospital Universitario de Maracaibo (Venezuela). La tipificación se efectuó mediante electroforesis en gel de campo pulsado (EGCP) y antibiotipia. Resultados: Entre pacientes, se obtuvieron 19 antibiotipos y 12 grupos (I-XII); mientras que, en el personal de salud, por EGCP se detectaron seis grupos (I-VI) y dos antibiotipos. No se encontró asociación estadísticamente significativa entre los antibiotipos y patrones de bandas obtenidos por EGCP (p > 0,05). Conclusiones: Por medio de la detección de marcadores de resistencia y mediante la EGCP, es factible diferenciar la naturaleza de las cepas SAMR de origen clínico. Los resultados obtenidos demuestran la posible transmisión intrahospitalaria de cepas SAMR; así como, su diseminación clonal en los servicios del hospital, particularmente en la UCI, durante el período estudiado.

Colonización vaginal por micoplasmas genitales en mujeres embarazadas y no embarazadas / Vaginal colonization by genital mycoplasmas in pregnant and non pregnant women

Para comparar la prevalencia de colonización vaginal por micoplasmas genitales en mujeres gestantes y no gestantes y determinar si existe asociación entre el embarazo y la colonización por estos microorganismos, se procesaron muestras de endocervix y exocervix provenientes de mujeres embarazadas (n = 80) y no embarazadas (n = 65) que acudieron a dos centros de salud de Maracaibo, Estado Zulia. Para el cultivo e identificación de micoplasmas genitales, se utilizó el kit de laboratorios bioMérieux, Mycoplasma-Lyo®. Se obtuvo una prevalencia de 10 por ciento para M. hominis y de 26,25 por ciento para Ureaplasma spp. en mujeres embarazadas; y de 35,38 por ciento para M. hominis y 20 por ciento para Ureaplasma spp. en las no embarazadas. Entre las embarazadas, Ureaplasma spp. fue más frecuentemente aislado tanto en pacientes sintomáticas como en asintomáticas; mientras que entre las no embarazadas, M. hominis fue más común entre las pacientes sintomáticas, sólo un caso (1,54 por ciento) era portador asintomático de Ureaplasma spp. El mayor porcentaje de positividad se obtuvo en primigestas (48,71 por ciento) y durante el segundo trimestre de gestación (34,21 por ciento). No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre la colonización vaginal por micoplasmas genitales según edad, número de gestas y trimestre de embarazo; pero si entre la sintomatología presentada y la colonización vaginal por micoplasmas genitales. Tampoco se demostró asociación significativa entre el embarazo y la colonización vaginal por estos microorganismos. Los micoplasmas genitales son igualmente recuperados de mujeres embarazadas y no embarazadas; siendo M. hominis el micoplasma más frecuentemente aislado en mujeres no embarazadas y Ureaplasma spp., en el grupo de las gestantes.